HPLC kromatogramoknál a holtidőhöz tartozó csúcs miért olyan alakú amilyen?

Azt nem holt időnek, hanem holt térfogatnak mondják, mert az idő változhat a folyási sebesség függvényében, de az oszlop térfogata nem.

A csúccsal kapcsolatos kérdésedre, a kromatogram képe nélkül cak találgatni tudok.... szóval azon anyagok számára, ami nem kötődnek az állófázishoz, a HPLC-s oszlop gélszűrőként viselkedik. Ezért a mozgó fázis térfogatának megfelelő térfogatnál megjelenhet az áteső. Gondolom reverz fázikú HPLCről beszélsz. Ott egy acetonitril gradienssel eluálunk, miközben 220nm-en detektáljuk az átfolyó elnyelését. Ha vakot futtatsz, akkor látni fogod, hogy a gradiens növelése során az elnyelés egyre nagyobb lesz, amit a növekvő acetonitril koncentráció okoz. A helyzet az, hogy az alap A-puffer is tartalmaz acetonitrilt, ami már kismértékben is képes megnövelni az elnyelést a mintához képest, amiben valószínűleg nem teszel acetonitrilt (ami nem túl szerecsés). Ezért, amikor az acetonitril mentes minta megjelenik az átesőben, az elnyelés lecsökken.

De mint mondtam, ez attól függ, hogy mit kromatografálsz, milyen A,B puffert használsz, és persze a kromatogram képe nélkül csak találgatni lehet.