Valaki el tudná nekem magyarázni az RFLP módszert?

A restrikcios enzimek csak adott, rajuk jellemzo pontokon hasitjak el a DNS-t. Peldaul az EcoRI nevu enzim kizarolag a GAATTC helyen vag.

Ezek a GAATTC-k a DNS-en viszonylag veletlenszeru elrendezodesben szerepelnek, igy peldaul tegyuk fel, hogy van egy ismert 5000 bazsparos DNS-unk, amit 3000 + 1500 + 500 bazisparos darabokra (FRAGMENTEK) tudunk vagni. Ehhez ketto darab GAATTC reszre van szukseg, amit megprobalok az alabbi abran szemleltetni (E betuvel jelzem):

---------E----E--

Tegyuk fel, hogy egy mutacio miatt a masodik hely GAATTC helyett GAATGC lesz. Itt mar nem hasit az enzim:

---------E------

Ekkor az 5000 basiparos DNS-t egy 3000-es es egy 2000-es darabra tudjuk felhasitani.

Persze ehhez szukseg van ahhoz, hogy a mutacio egy enzim hasitohelyen erintse a DNS-t. Szerencsere enzimbol rengeteg van, peldaul van olyan ami a GGGCCC vagy a TTATAA vagy a CCATGG vagy a CATATG vagy hasonlo helyeket ismeri fel. Tehat jo esely van ra, hogy ha barhol a genomban tortenik egy mutacio, az VALAMILYEN enzimhelyet el fog rontani (de az is lehet, pont letre fog hozni). Az olyan mutacio, am sem el nem ront, sem letre nem hoz semmifele enzimhelyet, nem okoz RFLP-t.

A fragmenteket utana elektroforezissel tudod elemezni.