No, nem a kezdetű mondatnál kell vessző?

Ez ingadozó, mind a kettő jó lehet.

Ha a "no" önálló tagmondat értékű, amolyan megszólításféle, akkor kell. De többnyire inkább nem. Pl. "No nem a nénikédre gondoltam."

FYI:

OH.327.:

"A na, no mondatszó gyakran használatos a párbeszédekben a beszélgetőpartner egyfajta buzdítására, a helyeslés kifejezésére. A na többféle kapcsolatot alkot ebben a funkcióban: Na ugye?; Na tessék!; Na látod! Ilyenkor a vessző nélküli írásmód a helyes, ugyanis ez jelöli a mondat szünet- és hangsúlyviszonyait: Na látod, megmondtam, hogy sikerülni fog! A vessző használata másfajta hangsúlyt és szünetet jelöl, így a jelentés is

megváltozik: Na, látod, már kibukkant a repülőgép a felhők mögül."

Vagyis konkrét, egzakt szabály nincs, és a legjobb, ha a füledre hallgatva döntesz (vö. szünet- és hangsúlyviszonyok).